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姓名:蒋泽群
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FLIM
DCS-120 超级 MPC FLIM 系统是 Becker & Hickl 推出的多光子/共焦荧光寿命成像显微镜系统,具备从紫外到近红外的窄带可调激发能力。该系统将宽调谐超快激光器的多光子激发与倍频单光子激发相结合,在单一平台上实现覆盖 400 nm 至 1300 nm 的激发范围。配备两个完全并行的 SPC-180NX 检测通道,时间分辨率低于 20 ps FWHM,支持高灵敏度、高光子效率的快速采集。数据分析通过 SPCImage NG 软件进行 MLE 拟合(GPU 辅助),适用于生命科学和材料科学中的先进荧光寿命研究。
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Becker & Hickl 推出的 DCS-120 超级 MPC FLIM 系统是一套多光子/共焦荧光寿命成像显微镜系统,具备可调谐激发能力。该系统将宽调谐超快激光器(OPO、Ti:Sa)的多光子激发与宽调谐飞秒激光SHG的单光子激发相结合,在单一平台上实现了从紫外到近红外的窄带可调激发覆盖。系统配备两个完全并行的 SPC-180NX 检测通道,提供低于 20 ps FWHM 的时间分辨率,并支持高灵敏度、高光子效率和快速采集的数据获取。数据分析由 SPCImage NG 软件以 MLE 拟合(GPU 辅助处理)方式完成。
DCS-120 系统基于快速振镜激光扫描、去扫描共焦检测(共焦模式)、非扫描检测(多光子模式)以及 bh 的多维 TCSPC FLIM 技术。在多光子模式下,系统利用可调 Ti:Sa 飞秒脉冲激发,在 680 nm 至 1300 nm 范围内实现选择性激发。在共焦模式下,系统通过对多光子激光进行窄带选择性倍频,覆盖 400 nm 至 640 nm 的紫外和可见光范围,并将皮秒持续时间的激光脉冲通过光纤传送到显微镜,以获得最佳共焦性能。扫描速率可低至约 1 μs/pixel。
系统支持的操作模式包括 TCSPC FLIM,涵盖两个(多)光谱或偏振通道、时间序列、Z-堆栈、马赛克(x、y、z、时间)、FLITS(荧光寿命-瞬态扫描)、与 FLIM 同时进行的 PLIM(磷光寿命成像)、光子相关(FCS、FCCS、门控 FCS),以及单点荧光和磷光衰减测量。
扫描头采用快速振镜激光扫描光学原理,配备两个独立激光输入,分别为光纤耦合输入(紫外加可见光)和自由光束输入(近红外)。光学激光功率控制通过连续 ND 滤光片轮实现。扫描控制由硬件执行精确激光扫描和快速回扫,以实现快速采集。图像尺寸范围从 16 × 16 至 4096 × 4096 像素,行扫描范围为 16 至 4096 像素。X 扫描支持连续扫描或逐个像素扫描,Y 扫描为逐行扫描。系统支持软件控制带有模拟调制输入的激光器,并在回扫期间和扫描停止时进行光束消隐。帧频和扫描速度可自动选择最快速率或手动选择,同时提供交互式扫描区域选择、硬件缩放与偏移、快速预览功能以及光束驻留功能。
共焦检测部分配备两个直接连接到扫描头上的探测器。主分光镜采用无需对准的可交换式分色镜,提供长通、多波段、宽波段和多光子选项。二次分光镜轮内含三个二向色分光镜、偏振分光镜,支持 100% 到通道 1 或 100% 到通道 2 的配置。每个通道设有独立的针孔轮,针孔对准通过电子方式经由压电微动平台实现,提供 11 个针孔从约 0.5 到 10 AU 的尺寸选择。每个通道串联两个滤光片滑块用于发射滤波。
多光子检测采用非扫描探测器,连接到显微镜后部的外荧光端口,二向色镜和带通滤光片插入显微镜标准滤光片立方体中。NDD 探测器配备快速光学快门,具有光量过载保护功能。
系统可选配两种 TCSPC/FLIM 模块。SPC-180NX 模块提供典型值 2 个、最多 4 个并行 TCSPC/FLIM 通道,电气时间分辨率为 1.6 ps RMS / 3.5 ps FWHM,最小时间通道宽度为 405 fs,饱和计数率为 12 MHz。SPC-QC-104 模块提供典型值 2 个、最多 3 个并行通道,电气时间分辨率为 16 ps RMS / 小于 39 ps FWHM,最小时间通道宽度为 4 ps,饱和计数率为 40 MHz(活动通道共享)。两种模块均支持通过路由功能在 16 个通道中同时记录多波长数据。TCSPC 系统的运行模式包括硬件预分析成像、光子事件流(FIFO)成像、相关点测量、长时间尺度强度(MCS)、马赛克成像、时间序列成像、多探测器操作、循环和重复功能以及自动保存功能。
共焦检测器直接耦合到扫描头。标准配置为 HPM-100-40 混合探测器,配备 GaAsP 阴极,波长覆盖 250 至 720 nm,最适合与 ns 寿命染料一起使用。选配 HPM-100-06 探测器具备小于 20 ps FWHM 的 IRF 宽度,波长覆盖 220 至 650 nm,最适用于 ps 寿命的自发荧光研究,仅用于共焦检测。选配 HPM-100-50 探测器波长覆盖 400 至 900 nm,最适用于长波长荧光。另可选配 MW-FLIM GaAsP 多波长探测器。NDD 探测器直接耦合到显微镜的后端口,检测器连接组件包括用于激光阻挡、二色镜和带通滤光片的空间。
数据采集软件为 bh SPCM,并配备用于集成外部设备的 bh LabVIEW。扫描仪控制软件集成在 SPCM 中。系统支持 Windows 10/11 64 位操作系统。数据分析软件为 bh SPCImage NG,采用 MLE 拟合(GPU 辅助处理)原理。函数模型包括 IRF 卷积单、双或三分量指数衰变,可选的考虑不完全衰减模型以及偏移分量模型。IRF 建模支持拟合衰变数据的合成 IRF 函数、从数据中自动提取 IRF 或测量 IRF。
共焦 FLIM 模式下,对多光子激光器进行窄带选择性倍频,以覆盖 400 nm 至 640 nm 的紫外线和可见光范围,皮秒持续时间激光脉冲通过光纤传送到显微镜以获得最佳共焦性能。多光子 FLIM 模式下,可调 Ti:Sa 飞秒脉冲激发在 680 nm 至 1300 nm 范围内实现选择性激发。
| 参数 | 规格 |
|---|---|
| 原理 | 从紫外到近红外的窄带可调激发,快速振镜激光扫描,去扫描共焦检测(DC,共焦模式),非扫描检测(NDD,多光子模式),以及 bh 的多维 TCSPC FLIM 技术 |
| 激发 | 多光子模式:可调 Ti:Sa fs 脉冲激发,在 680 nm 到 1300 nm 范围内选择性激发。共焦模式:多光子激光的窄带选择性倍频,覆盖 400 nm 至 640 nm 的紫外和可见光范围。皮秒持续时间激光脉冲光纤传送到显微镜,以获得最佳共焦性能 |
| 扫描速率、像素停留时间 | 低至约 1 μs/pixel |
| 一般操作模式 | TCSPC FLIM:2 个(多)光谱或偏振通道;时间序列、Z-堆栈、马赛克(x、y、z、时间);FLITS(荧光寿命-瞬态扫描);与 FLIM 同时进行的 PLIM(磷光寿命成像);光子相关:FCS、FCCS、门控 FCS;单点荧光和磷光衰减 |
| 参数 | 规格 |
|---|---|
| 光学原理 | 快速振镜激光扫描 |
| 激光输入 | 两个独立输入,光纤耦合(紫外 + 可见光)和自由光束(近红外) |
| 光学激光功率控制 | 连续 ND 滤光片轮控制 |
| 参数 | 规格 |
|---|---|
| 探测器输出 | 两个共焦检测探测器直接连接到扫描头上 |
| 主要分光镜型号 | 无需对准的可交换式分色镜:提供长通、多波段、宽波段和多光子选项 |
| 二次分光镜轮 | 三个二向色分光镜,偏振分光镜,100% 到通道 1,100% 到通道 2 |
| 针孔 | 每个通道都有独立的针孔轮 |
| 针孔对准 | 电子,通过压电微动平台 |
| 针孔尺寸 | 11 个针孔,从约 0.5 到 10 AU |
| 发射滤波器 | 每个通道串联两个滤光片滑块 |
| 参数 | 规格 |
|---|---|
| 非扫描 (NDD) 探测器 | 连接到显微镜后部的外荧光端口,二向色镜和带通滤光片插入显微镜标准滤光片立方体中 |
| NDD 探测器光保护 | 快速光学快门,具有光量过载保护功能 |
| 参数 | 规格 |
|---|---|
| 原理 | 硬件控制精确激光扫描,快速回扫,实现快速采集 |
| 图像尺寸 | 帧扫描 16 × 16 至 4096 × 4096 像素,行扫描 16 至 4096 像素 |
| X 扫描 | 连续扫描或逐个像素扫描 |
| Y 扫描 | 逐行扫描 |
| 电子激光功率控制 | 软件控制带有模拟调制输入的激光器 |
| 光束消隐 | 回扫期间和扫描停止时需要软件控制激光功率 |
| 帧频/扫描速度 | 自动选择最快速率或手动选择 |
| 扫描区域定义 | 交互式扫描区域选择、硬件缩放 + 偏移 |
| 快速预览功能 | 是 |
| 光束驻留功能 | 是,交互式测量点选择 |
| 参数 | 规格 |
|---|---|
| TCSPC / FLIM 模块 | SPC-180NX / SPC-QC-104 |
| 并行 TCSPC / FLIM 通道数 | SPC-180NX:典型值 2,最多 4;SPC-QC-104:典型值 2,最多 3 |
| 电气时间分辨率 | SPC-180NX:1.6 ps RMS / 3.5 ps FWHM;SPC-QC-104:16 ps RMS / <39 ps FWHM |
| 定时精度 | SPC-180NX:1.1 ps;SPC-QC-104:11 ps |
| 最小时间通道宽度 | SPC-180NX:405 fs;SPC-QC-104:4 ps |
| 饱和计数率 | SPC-180NX:12 MHz;SPC-QC-104:40 MHz,活动通道共享 |
| 记录多波长数据 | 通过路由功能在 16 个通道中同时进行 |
| 运行模式 | 硬件预分析成像;光子事件流(FIFO)成像;相关点测量、长时间尺度强度 (MCS);马赛克成像、时间序列成像;多探测器操作、循环和重复功能、自动保存功能 |
| 参数 | 规格 |
|---|---|
| 数据采集软件 | bh SPCM、用于集成外部设备的 bh LabVIEW |
| 扫描仪控制软件 | 集成在 SPCM 中,bh LabVIEW 用于集成外部设备 |
| 操作系统 | Windows 10 / 11 64 位 |
| 数据分析软件 | bh SPCImage NG |
| 数据分析原理 | MLE 拟合(GPU 辅助处理) |
| 函数模型 | IRF 卷积单、双或三分量指数衰变;可选择考虑不完全衰减;偏移分量模型 |
| IRF 建模 | 拟合衰变数据的合成 IRF 函数、从数据中自动提取 IRF 或测量 IRF |
| 参数 | 规格 |
|---|---|
| 共焦 FLIM | 对多光子激光器进行窄带选择性倍频,以覆盖 400 nm - 640 nm 的紫外线和可见光范围。皮秒持续时间激光脉冲光纤传送到显微镜,以获得最佳共焦性能 |
| 多光子 FLIM | 可调 Ti:Sa fs 脉冲激发,在 680 nm 到 1300 nm 范围内选择性激发 |
| 参数 | 规格 |
|---|---|
| 共焦检测器 | 直接耦合到扫描头 |
| NDD 探测器 | NDD 探测器,直接耦合到显微镜的后端口。检测器连接组件包括用于激光阻挡、二色镜和带通滤光片的空间 |
| 标准探测器 | HPM-100-40 混合探测器,带 GaAsP 阴极,波长 250 至 720 nm,最适合与 ns 寿命染料一起使用 |
| 选购件 | HPM-100-06 检测器,FWHM IRF 宽度小于 20 ps,波长 220 至 650 nm,最适用于 ps 寿命的自发荧光研究,仅用于共焦检测 |
| 可选 | HPM-100-50 检测器,波长 400 至 900 nm,最适用于长波长荧光 |
| 可选 | MW-FLIM GaAsP 多波长探测器 |